桤木群体遗传分化和抗涝性分析pdf香港马会最快开奖记录

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  桤木群体遗传分化和抗涝性研究 卓仁英 (中国林业科学研究院北京100091) 摘要本文从我国四川省及周边地区采集的12个桤木种源以及“九五” 国家科技攻关专题“长江中下游防护林植物材料选育与培育技术研究”中初 选出的21个优良无性系为试验材料,结合从欧美地区引种的桤木属植物适 应性研究,对桤木不同群体遗传分化、桤木种源的遗传变异进行系统研究, 阐明桤木的地理变异规律,对我国桤木进行种源区划,为桤木的生产应用奠 定理论基础,在此基础上,系统研究了桤木不同种源及无性系抗涝性的遗传 变异,阐明桤木抗涝生理基础,同时建立进行抗涝性筛选的指标组合,初选 出一批具有较强抗涝性的无性系和种源:总结了桤木无性系测定的初步结果 以及无性繁殖研究的结果。对今后桤木的研究重点和方法提出建议。具体方 法和结果如下: 1.1999年、2000年分两批从加拿大引进了分布于欧洲、美洲的儿种j4 个桤木属植物种或种群,并结合我国桤木、台湾桤木、赤杨、辽东桤木等桤 木属植物引种试验进行适应性测定,研究发现,除我国特有的桤木外,欧洲 桤木、齿叶桤木基本能够适应我国南方气候条件和立地条件,种子发芽率相 对较高,苗木越冬保存率良好,,土丧牧好,基本能够适应我国南方地区的气 候条件,在我国南方地区具有广阔的应用前景,今后可以加强引种,扩大适 应性测试范围。这是世界范围内首次大规模引种和适应性研究。 2.通过对桤木的DNA不同提取方法的提取效率比较,建立了利用液氮结 通过对桤木PCR条件的比较实验,建立了桤木RAPD优化反应程序,填补了 桤木属植物该领域的研究空白。并利用该程序对桤木12个种群的群体遗传 分化进行研究,结果表明桤木群体遗传分化程度较低,仅10.16%变异存在于 群体问,群体内变异远丰富于群体问,因此桤木育种的优良单株选择更重要。 3.利用1996年、1998年采集于我国四川I及周边地区的具有较强代表性 的22个桤木不同种源,通过幼年期的高生长、胸径、叶鲜重、IJ.1‘干重以及 III 时片含x量黪分橱,溺明了穗本生长往技主萋受海拔赢度懿彩嫡,遗嵇滋纬 度的增加而递增,呈现出以垂直变异为主、纬向变异为辅的士也理变异击见律。 通过分析比较,结合RAPD实验结粱以及液型分析结果,将槌木22个种源基 本可以戈1分为矧嚣囊淡、矧中瑟托嚣、矧j£逐释鄂瑟、渝东产嚣等霞令产露。 4。在桤本无性系抗涝性研究中,发现器指标如离生长率、基径、叶片叶 缀素各残努含溪变豫、SOD酶活瞧、瀚A会量、时片可漆稳鬣鑫、乙醇麓氮 酶活力变化等在桤术无性系问差异都达到恩著或极显蓍水平。桤木主要通过 增强SOD、ADH等酶系统抵御涝溃引起的无氧呼吸,同时基部皮孔增生、形 戏不定摄吸浚戴气,以维簿正常室长发麓。耪步确是了时燎裳b、竞合遮率 基径和SOD酶活性等指标作为抗涝性品系筛选的指标组合,篱次提出了利展 校耱生理研究手段耧数理统诗分手厅建立拣涝瞧选择攒挺缝合。耪步簿选了囊 36、安lO、容3、i15等抗涝无&系i:广元、南江、邛蝾等抗涝种源。 5.首次营建了桤术无性系测定和种子网相结合的试验林,填补了国内外 警巍。逶过穗本无瞧系溅定,秘步簿选盘蔗2、袁4、容5、察3、001等遮 生挺优良无性系。在橼本无往繁葱试验中,解决了棒内优栋假萌的问题,研 究发瑷透光凄楚影醺拣蠹优拣镘缓麓蒡麴美链因子,篱予羹袋穗母拣更弯测 予生产穗条。扦插试验结果表明穗条的锪满度和木疆化程度对扦插成活率有 盥鬻影响,圆满充实、半木质化的穗条扦插成活率最觏:稻田土扦插育苗成 滔零毫,蓥本生长矮爨凑。春季抒瓣钱予覆季或冬攀抒矮。 本文通道对桤术菌期进行包括群体遗传分化帮抗涝健的遗传变异规律研 究,筛选出~歉撬涝无注系帮秘派,建立了桤本攘涝瞧簿逸糖标组合,为稳 本在长江中下游簖护林中的推广艨糟提供了科学菝弱,并为今后进一步对穗 术进行遗传改良提供丰富可靠的数据和瑕涂指导。 美键词:楚本属逡传多态性 挠涝一陡 遗传变异 耱漾试验 无整系 Geneticdifferentiationbetween and toleranceofAlnus flooding Crernastogvne population Zhuo Renying(Forestgeneticbreeding) DirectedPro£ChertYitai by Abstracts:Adetailedand onAlnus was systematicstudy Cremas£ogyne outto carried anddemonstratethe vatiations investigate genetic between and thebasesof12A。 populationfloodingt01erance,on that and CremastogyneprovenancesselectedinSichuanPreyinceareas around Sichuan,21 C10nesselectedin outstanding preyiOUSstudies, andAlnus introducedfrom andAmerica ssp.materials Europe during 1999to2000wascarriedatthesame mainresuitSareas time.The foilows: 1. IntroductiOn 54seediotsof1l Alnus experiments spp. in Canadaint999 distributedandAmericawereintroducedfrom Europe outwith and2000.andaccommodationwerethuscarried experiments theseseedsaswellasseeds Alnas colleereddomestically,namely showed thatbesidestheendemic Alnus speeies can the elimatesandsoiiconditions A。rugosa local generallyadapt insouthern rateofseed,highwinter China,withhighgerminating survivalrateof fast meansa rate;which seedling。。?dgrowth future inSouthernofChina. promiSingPlantation 2。Genetiedifferentiationtests ofthetilethods Bycomparison withdi a A fferentextractionrateofhueleolusDNA. typical nucleolusDNAextractionwasset canmeet Cremastogyne process up,which theDNA ofRAPD.And purificationrequirements populationgenetic testedwith variationsof 12 were A.Cremastogynepopulations standardizedRApDreaction showedthatthereare progra珀.Results minutegeneticvariationsbetween 10.16%),With populations(only much variationswithin isthusconeludedthat higher population。It totheselection0f A shouldmoreattention Cremastogynebreedingpay into trees。The12tested canbe four superior populationsp10tted North—Western producingdiStricts,i.e.South-Western,Contraland Hubeiand Sichuan Sichuan Western district,CentraldiStrict,and Eastern district cluster Chongqing through analysiS. tests wlriationsofA. variationGeographical 3,Geographical were andtestedthrough Cremastogynepopulationsinvestigated V tall fresh plantationexperiments,analysisgrowth,stemgrowth,leaf andleafN concentrationtestswith22 weight.1eafdryweight selectedinSichuanandotherareasaroundSichuanin1996 populations andt998.ItiSconcludedthat charactersofA are growth Cremostogyne relatedwith relatedwithaltitude,whiist negatively positively further ofRAPDtestsand 1atitude.ThroughanalYSiS.results is the areaofA. phenotypeanalysisincluded,itsuggestedproduce bedividedintofour and Cremostogyne Sichuan Sichuan Western North-Westerndistrict,CentraldiStrict,and HubeiandEastern diStriCt, Chongqing tolerancetestsItwasfoundthatindexessuch 4.FIooding of as growthrate,grounddiameter,coneentrationingredients height inleaf chlorohyllS,SODehzymeactiVity,MDA in varied ADH significantly proteinleaves,andenzymeactivity between resiststhe caused clones.A.Cremastogynenon—oxygenbreathing theactivitiesofSODandADH byfloodingmainlythroughimproving Ienticels inthebaseoftreeand enzymes,whilechangebigger sprouts adventitiousrootstoabsorb#l tomaintainnormal or氇oxygen growth and fast clonesand development.An36,Ani0,An35growing Guangyuan, were ascertainedas Nanjiang,Qionglaiprovenancespreliminarily floodtolerant/resistantonthebasesOfa indexcriteria compound and coveringchlorohyllsb,photosynthesis activity speed,SODenzyme stem growth. 5.Clone propagation selectedas with preliminarilyfast fineClones.Whenbreeding growing methodofshoot from was Clones,the deveiopmentstumpsconstructed, iSfound the IightpenetrationtObe most factorthat important influencestheshoot from the developmentstumps,thehigherstump morethebranchesshoot.AscUtt height,the for ing summerwoodandthe of havethemost CUtting degreelignification effectson the important survival is betterseasonthan rate;spring summerandwinterfor hormonetreatmenthasno cuttingbreeding:and effectsonsurvivalrate. positive words:Afnusat㈧i。 Key SSp..ge polymorphism,floodingResistance Genetic VariatProvenance ion{ Division,clone。 VI 引意 弓l 言 Burk)、JII siobol出aria)、东北赤杨(A.mandshurica)。 穗术属酌地理分布区主要为欧洲、诬渊、非洲、j£美及中南美洲,主要 分布予北半球,寒激带、滠带和驻热带地区,美洲最南达秘鲁。褒我国主要 分布予东北、华北、华南、华中、西南地区。桤木是产自我国的桤木属植物 l1个秽中最羹要豹一个特有静,英承分每区主要良成都鑫撼为中心,逮及靼 川全省、贵州北部、湖北西部、陕西南部、甘肃东南部等地,尤以邛崃山地 生长最婷。6。年代以来,滚、鄂、皖、赣、闽、浙、苏、沪等长江中下游逢 区相继引种栽培,并已获得成功,如今,桤木的栽培区域西趣四川康定 (33N),适生栽培藏围扩大到长江孛下游广大地区。 一、研究目的和意义 稳,本藩{囊锈是j#豆释霜氮树种,多为灌本釉乔本,喜承湿,大多生长予 河滩、溪沟两舅及低山丘睃、低温地,是河岸护堤和水湿地区重要造林树种。 稽木属植物适应性强,耐瘠薄,生长迅速,是十分璎您的荒山绿化树种;橙 本属棱物根系发达,具有投瘤或藏根,潮氮能力强,能固沙傈土,增加土壤 肥力,是理想的生态防护林和混交林造林树种;桤木属植物叶片产量高,含 氮量事塞,楚一秘俊受懿天然怨秘纛绿莰镯秘。毽本疆禳携本稼李芎屡轻辍, 硬度适中,耐水湿,木材用途广,是重嚣的建筑用材、矿柱材和家具材、造 纸耪、人造板耪,斑可蘑{乍薪炭耪,丘乏强{乍为纸浆舔耩极爨开发潜力,已镀 列为优质造纸材树釉,是营造短周期工业原料林的重要树种之一。果序、树 皮可以作染料,提制栲胶,花产蓬丰富,为重要蜜源树种。总之,桤本属植 物是集造纸秘、爱楗、藜孛薏、饲料葶珏绿化澹荒为一{零魈多功缝撼秘,不仅具 雩富 有重要生物擎、生态学意义,丽越还翼霄重要豹生产应瘸价值帮经济恚义。 因此目前己在全球引起广泛的关注和深入的研究,并已成为世界热点研究树 种。 上世纪七十年代寒瓤,我国樱继开展三北、长江潞海、太行出等跨区域, 大规模、综合的防护林体系建设,增加了林草植被,部分地区的生态环境有 掰改善,毽寒箍获校本上勰决。耱逮存在转释结祷攀~,稳定滢差,经济效 虢不好等严重问题。因而对防护林林种进行选育工作势在必行。 本论文研究内容为导筛陈益黎先生主持的“九五”国家科技攻关专题《长 江中下游防护林植物材料选育与培育技术研究》的一部分。长江中下游地区 的防护林体系建设砖整个长防林建设的主要组成部分,是长防林体系建立整 体缝懿要求。对予长江孛下游兹糖护转建立斡熙楗,簧求生长良好,适廒性 广,并具有一定的经济价值。七十年代以来,华东、华中地区广泛引种桤术, 生长表现良努,适寝佳强,是典黧懿多功髓薅稀。可作先锋耱释改良±壤壤 与其他树种混交造林,提高效益,‘因而樾木可以作为长江中下游防护林体系 建立中具有开发利用潜力的理怎÷并:。舀前国内对稻术遗传改良研究重褫不 够,攘废疆究超当薄弱,远远不糍满足生产上粒需要,因此加强撼本遗传改 良研究具有重要意义。 一羧两言,撵释疼存霞多静麓次静瀵簧变舜。棼末遗健浚鑫应该充分翻 用树种内存在的这些变异。而弄清种源地理变异是第~步。因而糟手从分子 永平上对桤木各种源的遗传分化规律避行研究,有劲予利用稀源漤次上静交 巽,为长江中下游防护林建设提供优良的携本葶中源:长江中下游地区水瞒密 布,经常遭受水涝胁迫,急需抗涝性树种和抗涝育种研究,本文综合分析渍 水耱追下形态学特锤、生残、生化层次主饯滏反应,驭揭示握本按涝缝遗传 变异规律,建立抗涝性选择指标体系,并选择一批优良抗涝性品种。 本论文将获生物学(耋毫理垒佬)、稀木遗传育静举、分子生秘学、生态 学的角度对桤木的12个种源、2i个无性系等供试材誊斗分予水平上的遗传分 化、光合特性、抗涝性等方面送行详细深入研究,旨在为选择适合长江中下 游营造结护栋的优良糖静及抗涝‘婚丰匕摭{本系的建立方法等方蘑提供参考:也 为今后进一步进行桤木幼一成相关研究,早期预测及选择掇供可裁的数据: 澍露为今后对楚本遴~步浚爱繁莴戳及大魏模箍广、零l秘遗棒提供一些秘学 2 引窘 依据。 二、技术路线及可行性论证 我国是世界上地理生态复杂程度最高的圈家之一,森林檀物釉类(物静) 资源仪次于热带地区的巴诃和印尼,森林植被区系及其遗传多样性为世界之 最。森拣檀魏秘凄验逮转多撑落程度擞其丰赛瑟虽复杂。拣本穆溪瓷漂收集 是育种工作的基础,为了扩大桤木育种群体,丰富育种材料,我们进行了种 覆资源收集这颈工佟。著分析亏枣争植物在我篱南方逸区(主要为浙江遗区) 的发棼情况、生长、光合特性以及越冬情况,选择邋宜于我国南方地区引种 的桤木属植物材料。 。 遗传变器是楗物弯秽躯理论基礁,香港马会最快开奖记录。不嗣物种阂遗传分化程度奄明攫差 异,为了阐明桤木的不同群体的遗传分化程度,我们利用RAFD(随机扩增多 态淫DNA)对箍本i2令释群递学疆究,簿对绥合穗本耪漂试验激发覆产缝的 地理因子、气象因子分析桤本的遗传变异情况和地理变异模式,并进行种源 区翔,为生产上袍术种子调拨掇供理论指导。 我国长江中下游地区地域广阔,人口众多,是我国最羹要的工农业生产 基地之一。在该地区,永系级横,湖泊众多,由于上游地酝植被资源破坏, 东±浚失严羹,经嚣遭受东涝灾客,垂姥长江中下游建区防护抟建设急嚣撬 涝性强的树种材料和抗涝商种研究。桤木作为拟在长江中下游地区发展的树 释之一,萁抗涝注税理霉}究稻撬涝品静选择极为重要。一般两言,一种秫本, 由于长期的地理隔离和自然选择、人工选择的结果,种源差异是比较显著的, 而且这种种源差异也正是种源选择的基础。种源差羿主要表现在生长方面, 如离生长、撼径生长、生物量耪摄筹.挠逆挫,包掺抗生物因素胁追与≈}生 物因素胁迫。对于桤木而言,其抗涝能力也随种源不同而裔很大变异。不仅 表受上鸯攘大懿蓑髯悉量疆应裔生理生优待魏也有缀大差努。逶过大工控裁 胁迫,测定反映抗涝性的形态学指标(菌高、基径)和生理生化指标(丙二 醛(瀚A)含潼、乙簿脱氢酶(ADH)酶活往、许绿豢各成分含量、超氧化物 岐化酶(SOD)活性、可溶性蛋白含量等),综合利用聚类分析、欺型相关分 析、多元方豢分析等统计分析方法研究各性状与种源地理位置及备性状间的 程关瞧,建立获涝性筛选敬据据体系。 无性系育种是林木育种的发展趋势,通过无性系育种,可以获得更高的 { 弓j言 遗传增菔。已有研究表礴,桤本属植物群俸内遗传分化远高于群体闻遗传分 化,可见桤本无性系育种更为重要。无憔繁殖技术是无性系育种的重要方面 之一,解决了觉性繁殖问题,稳术无性才可能褥以雄广应用。 通j_篷该礤究,可以了鼹夔期撼本释滚闻的变异情提,阐爨疆本抗逆髅魍 遗传变弊规律和群体遗传分化情况等,初步建立抗涝性筛选指标体系,并为 对其遴行深入辑究强供可靠静稀攀依据。 第一章糍枣壤援物遗蒋帮挣砑究避娥 繁一耄姥本瀵攘犊瀵传曹穗磷究遴蕊 黼辩对橼术耩糗黪辚究开黼裂孚,主要黎中予释源试验、拣惶生爨、基 羧缝鳃稳秽群体遗穗结构等方蘧,圭装包繇生长、潮氮、摭逆瞧躲及杂交育 种等讲究。 {。麟源试验鞠茺憔繁蘧磅突 拣术誉静盼辫零隳蟋是摄攘拣本瓣遗传爱舞栽簿,敷鬻遴黪学瑾谂,避 括抟术晶震黢良,培育灏晶静。遗传变异是林本育静的整袋前提条件,剿阉 挺秭现有懿鑫然燹簿糕律或透过不藏黪撬术方法试为截逑变要,遵过遘簿获 褥镄嶷懿秘,达裂浚状改良懿毽懿,拣本鸾霉孛蓄走裁蹲树秘瑷露疑遗传燮赛, 通过遗传溺滗《释潦/聚系试验、秃稳鬃试验簿)来邂耩合适熬德良秘耪。 由予毒拳术窝静髑潮妖,宠成一次觚树种选耩戴无能黎静避猩褥罄几十筚辩 阃,键这些测定城选择过程可以带来3096~loo%材积的遗传增益,可以撬离适 瘦瞧秘拣滋浚(粼瑟费,2001)。 耀努已舞爨了穗本耩撞物务枣饕撵释鲍雾年垒雾憋点不懑瞧状魏静潆试 验。大酃愚铃簿蕊瀚董疆生态、燮长、释子童理、稳狯产爨、零麓淫馥f密 度耧簿维筏凌)簿方瑟瓣研究。涉及瓣释烹要肖瑟稳本(蠢。rubra)、敬潦 美灏撼本(爿,crispa)等十余释。大多数往状在辩滚、豢系、个体间具有 et et et 显蓑蓑舅(Dangal,1994;Townsendal,1994;Hibbeal,1994; et et Onokpiseal,1994;Pierial,1989:Perullietal,1988:Pieri etaj,1988:{龇iet et81,1990:Komlenovicetal, al,1990:IAepe ot 1987;翻olinskial,1988:Dewal赫atal,1986)。豳嚣遗过弹漂、 窳襄、个体灏黪逡撵,在趋未属务橱张上获褥较大羽遗褥增溢跫珂能酌。毽 遮方避鹣礴突络涂与涮簇嚣工酶投漆磷震群体分纯熬结慕(黔群侮阕邃蕊努 纯远,l、予群髂蠹)浮在矛蘑。 红裢术魑分繇予j毫茭疆海潦、釜长予溪边辣憩淡谷憋鹣遮生满靖誊雩黪, 第一章艳术属植物遗传育种研究避展 瞧是穰有潜力的商糟纸浆原料树粹(Davidetal,1994)。研究浚菰涉及稀 子发芽、苜期生物懿、成林生长性状、千形、生理生态特征等。IUFRO进行 了北奖红桤木的大规模种源试验,一然国家还建立了红棍术造纸工业原料 抟。磷究结袋发嚣发芽3嗣后,茨本生貔量巍氮吸收在静源阗和耪源痰存在 显著差异;发芽5月后,群体间菌高没有显著差异;种源的生长性状在8年 生辩存在显藩差异:萃孛源溺干形指数虽然差髯较大,徨没裔达妥蘧著承平。 通过对红桤木(A.rubra)的40多个种源生理生态遗传变异研究袋明,光合 速率、呼吸逮度、气孔导度、气彳k对永蒸气聪亏乏的敏感肢、细胞内外c魄 浓度比率、本矮部求势等凌t手孛源内存在援显蓉的差舅,但种源间水分利用率 却没有显著麓异。对红桤木的地理变异研究表明,树高、胸径、芽绽放时间、 盱残落骏(ABA)含量、漫重等缓凌霹存在较强夔姥瑾交舅趋势。建理环缓 et et 在很大程度上影响桤木生长(Dangal,1994:Lesteral,1989)。1968 年美阉Oregon州建立了10片纽穗木释源试验椿,经过15年酌定期甏测, 发现资源闽农树毫、胸径、高径比方瑶差异显著,种源间于体积和地上部分 et 生物蚤也有明显差舜,其中以华盛顿西北部的两个种源表现最好(Lester al,1989)。舞生长、蕊经等在爿。矗utjnosa等黏源闯变化没有明显援律, 但两者之比却有显著差异,成活率、根生长农某些种源间也有极漫著差异。 穰、叶形态簿在A.露utinosa等羊孛源瓣龟畜鞠萎兹变异。磷究还发瑗形态、 J+B.(1998)通过对南非 生长指标可作为浅型选择的依据。IWolinski 丘corda招家系试验发现漪生长/胸径有极大的遥传力,可作为旱嬲选择酌獾 标。 有人从种子形态、生理等方面研究种源、窳系、个体间的遗传变异情况。 et et 的种源、单株间差异极显著(Oerullial,1988:E11iottal,1981); 贮藏条件会引起实垒蕾静遗传焚痒;冢系的赢生长、胸径生长蕈株遗传力稷 低:秘群生长特征的相关性高,但家系的生长特征向光性却很低,花粉粒大 et 小在一.cordata种源问没有显著差异,但在种群内部部有显著差辩(Pieri al,1988):嚣囿一原株藏嚣撩约各无瞧系革椽阕兹羚俸积却有照著变劳。 不同椴木属植物成熟花粉可溶性蛋白中可以检测如差异和种的特征缓自 (Falleriet et al,1988:Satioal,1970)。 6 第一章桤术属植物遗传育种研究进展 北卡州立大学和德国黑森林对欧洲桤木的立地要求、分类、遗传、造林 et 和木材特征的研究进行了综述(Goncalves 究人员认为,欧洲桤木适合于作纤维板和新闻纸,早期生长适宜于立地条件 较好的湿润地区。在波兰,欧洲桤木8年生时树高为7.3m,种源问在生长和 早春发芽时间上存在显著差异。在美国欧洲桤木的树高、胸径、材积、叶片 etal,1994)。 氮含量等性状的广义遗传力变动在0.03—0.93间(Onokpise 欧洲桤木在水分胁迫后叶片形志■兰理特征上表现出巨大的变化,表明欧洲 桤木的抗旱性具有较大的遗传改良潜力。在韩国,来自21个国家的欧洲桤 木53个种源参加了试验,其中7个爱尔兰种的生长和成活率表现较好(比 et 总体平均值高20-24%)(Han 洲桤木的木材比重、纤维长度的变异情况。种源间、个体间木材的相对密度、 纤维长度均有显著差异。地理起源、个体间、不同部位对木材密度等材性指 标都有较大的影响,与树高、胸径等没有相关性。万军、刘和林等(1995)对 部分桤木种源的优树子代苗期性状进行研究。桤木优树半同胞子代苗期性状 差异除侧枝数、根瘤数、根数等3个性状差异不显著外,其他各性状差异均 达到显著水平,研究结果表明家系选择是有效的。陈益泰等(1999)调查了我 国桤木自然分布区四川盆地及其周边地区21个不同产地桤术天然林或人工 林的生长、果实形态、树皮形态、干形、材色和木材密度等表型特征,发现 桤木种内存在极其丰富的产地和个体变异,其中在木材密度和果实形态特征 上,产地内个体间差异明显大于产地间差异。 无性繁殖就是利用植物的营养器官,而不通过两性结合过程再生植株的 繁殖方式。无性繁殖一般有两个目的:其一是大面积进行商业性营林,其二 用这种方法来大量生产优良种子。无性繁殖的优点就是能够稳定亲代的优良 品质,加速营林步伐,缩短育种周期。一般无性繁殖包括有嫁接、扦插、组 的积累有很高的增长,高生长也有明显增加。快速遗传增益是可以通过无性 繁殖的方法达到的。从一个侧面也说明了桤木属的组织培养是可行的。除了 用组织培养这种微繁技术来提高遗传增益外,对桤木属植物如爿.““tinosa、 hirsuta、彳.rubra等有性杂交子代优势苗也 A.nepalensis、A.japonica、A 7 第一辜艳术属植物遗传育释研究进袋 可醴通过嫁接、扦搔等方式进仃苑诬搽缱,避行大蔼积扩蹭,提离遗传灞益。 无性繁殖在撼木属树种中还是比较易行的。无性系育种也是当前林木育种领 域的一大热f1话题。 爨拣本生长趱期圾长,遗传浮稔困难以及短期效益不明显等特点影响了 林木常规育种的发展速度,近年来由于分子生物学的迅速发展以及MAS(标 记辖韵选择京释)蔽术蘸完善,使棒本骞静瑟箍薪黪发震税暹。 2。抗涝性鸯釉 我国长江、黄河等流域由于生态环境恶化,洪涝灾害频繁发生,造成巨 大的经济损失。在湖河源头造区植树造林,改善生态环境,培育强抗涝性种 植材料是解决我国涝渡土地利用和沿海、沿江地带泼涝灾害问题的根本途 径。 黧蠹夕}对转本抗涝{雯耋视不是,多数磺巍主要镑对嚣重涝睦挺群选择,蠢 商关林木抗涝性机理、抗涝性选择指标的研究较少。近年来由于世界各国环 境恶仡,洪涝灾害额繁发生,稀木抗涝往研究祷繇翻强。备稀耪速环境遴过 对生长及生赡系统的影响改变者树种的基因频率和遗传结鞫,最终改变了群 落的充分和结构。所以对于胁迫环境中植物的形态、生理生化研究,遗传成 分分拯裁残为藏逆燃弯秘臻究斡主要凌容。 水涝胁迫主要限制光合作用与有氧呼吸,而促进无氧呼吸,I垃有一些植 耪在永涝貉逡下光舍本隽并不改变,毽光台产耪输爨受隧,因产貔撩裁嚣洚 低了光合速率。淹水除了造成土壤缺魄外,对植物还有“水套作用”,引起 植杨体无氧呼吸,产生乙醇等有海中阀产裙,从而德植秘发生某擅适应往变 化,翅,促进叶片焱老、脱落,熬直径增加,通气缀织形成,产生不定根等, 其本质是淹水引起生长素和乙烯相互作用, 引起植物体各部分嫩长变化。 承涝弓趣植耪澎悫结椽发生瞻显麴交豫:基茎明显交凝,皮孔l墨黯,茎 基部形成不定根,植物体新叶形成受阻,叶片发红、变黄,并加快脱落。淹 永条件下,裰物体生长减瞧,时片减少、时瑟袄急麟下降。在涝渍胁遥整理 39 纸皮桦(BetulapapyriEeraMarsh.)在生长季节新叶迅速澎成并扩展,而涝 渡黪遗F,戆时形成受撼测,老时热唳脱落,使植株总时瓣积减少,树高、 第一章桤木属植物遗传育种研究进展 形成层、根系生长减缓或停止,甚至死亡(汤章城,1998)。试验还发现涝渍 胁迫使植物体原有的初生根系大量死亡,在水面的茎基部形成大量的不定根 或气生根(高景辉,1987)。 不同木本植物耐涝性有较大差异,种源、家系和无性系间耐涝性也有显 著差异。涝渍胁迫下,抗性不同的掉物根系生长情况和生物量差异很大,抗 涝性强的植物仅部分初生根死亡,茎基部形成不定根。橡胶树[伪ma 涝性差异明显,Fx4098家系生长最优,其高生长和生物量受影响较小,不定 根生物量增长最大(Tang,1982)。淹水胁迫引起植物气孔关闭,气孔阻力 上升,但耐涝植物在适应淹水环境后,气孔阻力又逐渐下降或恢复。火炬松 (所止姻taeda L.)半同胞家系苗在淹水胁迫下生长参数虽没有差异,但代 谢反应包括CO。量、乙醇和苹果酸积累、乙醇脱氢酶(ADH)活性却差异显著, 研究还发现淹水条件下材积变异中20%可归于耐涝性,而仅7%为种源的影响 (Shear,1988)。 存活率和高生长则是评价抗涝性强弱的最直接标准。存活率是评价植物 抗涝性的一个重要指标,长期涝渍胁迫下强抗涝性植物的存活率明显高于抗 性弱的植物。Angelo等(1996)试验发现,在连续2a以上的根涝条件下,美 国蓝果树和美国枫香(LiquidambastyracifJuaL.)的苗木成活率达95%,而 2种栎树(Ouercus ssp.)在1a之内全部死亡。多数情况下涝渍胁迫抑制 了木本植物高生长,但高抗植物受影响程度较小。 生理代谢的变化也是植物适应淹水胁迫的一个重要方式,研究表明抗涝 性不同的植物根系ADH活性、光合速率、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性、根 系淀粉含量以及气孔参数等指标在涝渍胁迫下差异显著。涝渍胁迫下植物问 叶片硝酸还原酶(NR)活性和相对质膜透性差异显著,可作为抗涝性评价指 标。在土壤浸水时3个黑杨派无性系苗木基茎韧皮部PAL活力和有机质含量 与对照相比差异明显,随着时间的延长,苗木体内PAL活力升高,苗木生长 为叶片保持低的淀粉浓度、受淹前根组织淀粉浓度高是耐涝树种在淹水条件 Marsh.) 持较高的气孔导度是落羽杉和洋白蜡(Fraxinuspennsylvanica 9 第一章桤术属植谤遗传育种研究避袋 的重要抗涝特征。涝渍处疆20d后,稀树(Salixsp。)的气孔开度黉驻恢 复,耐两静杨树(Populusspp。)却继续下降,说明气孔在一定程度上能反 应树种的耐涝能力。根系活力与植物抗涝性有~定的相关健。Wagner通过对 abies 生长了2-5、13a戆欧测云杉(PiceaKarst。拄涝性分橱,发理90% 的品种幼树与成熟植株间具有较强的正相关性,可见苗期抗涝性晶种选择具 有一定的可靠萑(Wagner。1994)。 国际上对桤木属植物抗涝性的进行了深入的研究。意犬利桤木不同地理 越源的实生菌对水分胁追商不同的反庳,种源闰差辩很显鬻。叶面积、呼吸 速率、本质郝水势、净光合产物电于涝客两减少。藤爿。矗utinosa无性系 在水分胁迫下叶面积、高生长却增加了,且生长快的无性窳比生长慢的无性 系豹逶应洼强。足乎没有~魏稳本可以在零发-F30C生存。 生理代谢的变化也是植物适应淹水胁迫的一个重要方式,研究表明抗涝 经不闰的植物根系ADH滔往、光合速率、苯淹氨酸觯氨酶(P矗L)活往、稷 系淀粉含量以及气孔参数等指标在涝渍胁迫—F差异照著。淹水处理后,慧大 利桤术[一.corda如(Lois,)Desf.]固氮酶活性在24h内急剧下降,并臣难 d 以恢复,红趱本懿鞠氮酶活性在熬}承蜃恢复了26%;凝系静N)H农淹承10 20 后显著增加,但淹7K d后,只有红桤木的ADH活性仍保持高水平,不定 穰平蚜生戆豢增葫了3.66%(占蕊生物麓)。涝渍耪逡下植锡藩时片磷酸述簸 酶(NR)活性和相对质膜透性差异显著,可作为抗涝性评价指标。在土壤浸 水时3个黑杨派无健系苗木基茎韧皮部PAL活力和有机质含量与对照相阮差 异明显,照饕时间嬲延长,茁术体建PAL话力丹高,茁本生长量骥显下降, 系要比生长溪戆逶应链力强。Gravatt辑变认洚时冀保持稳韵淀粉浓度、受 淹前根组织淀粉浓度高怒耐痨树种磁淹水条件下成活的重要特征。此外 Pezeshki研究认为部分气孔酶黧新开放和维持较离的气孔警度楚落蕊移军珏 洋白蜡(Fraxinus Marsh.)的重要抗涝特征。涝渍处理20d pennsylvanica 后,柳树(Salixsp.)的气孔开度明鼹恢复,而两种杨树(Popudusspp.) 却继绥下降,说骥气孔在~定程发上旋反应树秘豹瓣涝笈力。辗系活力与擅 86j8s Karst.)撬涝蓬分誊斤,发琨90%静品种幼瓣与残熬禳株阕舆有较强静 10 第一章桤木属植物遗传育种研究进展 正相关性,可见苗期抗涝性品种选择具有一定的可靠性。 由于植物抗涝机制的复杂性,单个生理指标有明显的局限性,因此必须 综合分析植物形态结构、生长、生理代谢反应等方面的变化,才能科学评价 植物的抗涝性强弱。但由于国内外对抗涝性的研究不多,对林木抗涝性机理 了解不深入,对形态、生长和生理代谢指标间的关系了解不足,因此有必要 研究形态、生长和生理代谢各指标之间的关系,建立抗涝性品种筛选的指标 体系,进一步阐明林木抗涝性机理,为林木抗涝性育种提供科学依据。通过 选择抗逆性单株无性繁殖或种源选择后,进行子代测定有可能培育出有较强 适应性、能稳定遗传的抗性品种。, 由于逆境条件的多样性以及植物对逆境胁迫反应的复杂性,各种生理指 标的应用受到很大的限制。此外一些木本植物的组织培养尚未成功,使组织 培养技术的应用有很大的局限。转基因技术方面的缺陷和人们对转基因植物 的安全性疑虑,其应用短期内也不可能有突破性进展o“。因此目前抗涝性研 究还主要集中于抗性机理研究和建立抗性指标体系,抗涝性育种主要是现有 高抗性品种的选择和推广应用。 木本植物抗涝性育种和其它抗性育种一样,还需兼顾其它重要性状。逆 境条件下除了抵御逆境的影响,还要兼顾高产、速生的生产需要。木本植物 抗涝性育种也要涉及亲本选配、优良家系、优良个体、区域化试验以及大规 模推广应用的问题。亲本选配首先要抓住抗逆性育种的主要目标,其次双亲 要优缺互补。此外,还应以逆境中的主导生态因子的策略为主导,兼顾其它 生态因子。 3.桤木属植物遗传多样性研究慨况 遗传多样性是生态系统多样性和物种多样性的基础,也是生物多样性的 重要组成部分。研究群体遗传多样性和遗传结构有助于人们深入了解物种对 变化环境的适应性的进化信息,解释物种的进化过程,在此基础上制定物种 传多样性研究方法主要包括表型变异和分子变异研究。 表型性状是指有机体可以被看到的形态结构和功能特性的总和(徐炳声, 1994),植物表型性状包括形态性状以及与植物适应性相关的生理和生活史 第一章{:=÷警!=物遗传育种研究进展 特性(葛颂等,1994)。自达尔文等发现物种变异以来,表型侄状成为研究 物种变异和进化的主要标记,表型变异是个体水平上遗传变异的体现,其有 et 简单直观的优点,还有适应和进化上的意义(gacilierial,1995)。 群体内和群体阉表霆交弄主要戳表鍪交异格届来表示。目前圜矫学者踅 着熏予研究与环境梯度密翻稻美酶生态往靛,或赣种中心分布区稻边缘分布 区之闻的表鳌攘袄的交异格局稀原疆(Jonas 选耩了3个不同海拔高度、6个纬度的16个四arkiaungufculata群体来薏犟 究表型变异程魔,对15个表型性状与海拔和纬度瓣关系研究中,毽稻发现 海拔与纬度淘静交鼍俸角决定了Clarkiaunguicula如翁表型变舅捂鼹。陈 益寨等(1999)对携本21个释源盼舒究表明,摧本秘源斑积秽源闻存在援 为丰富粒遗传变异,本榜密度、果实形态在秽源蠹变异显簧大予秘源阕。 亲零表型交异磷究是开展秽源试验、予代测定豹遗传学基础。结会环境 因子可敬避一步研究兹秘交异歌艘与生态黪境躲关系,阐明物季申款适皮性。 因此透过秽源试验竣子饯测定来磷究物释戆数量燃拔遗健变异及其逶应燃 罄缆是拣本辑究豹一个热点。缎幼年试验豹硬究结果往往越囱予夸大群体内 变募堰发,低熊了群体闼分化程度。 现代分子生物学技术豹发展和应用,馒遗传变异测定熏为简单,援进了 群体遗传结构瓢多样性螅磺究。七十年代拳发展起来的同工酶技术具有成本 低、操作容易,为共显性标记(Parkeretal,1998),邋用于处理大量样 本,至今仍在遗传多样性研究中占据着重要位置。近十几年来,基于DNA的 性)、SSR(简单序列重复)、DNA测序等分子标记技术。 异研究结论。他们认为木本植物中自交植物的o。一般大于0.50,而远交植 物的中。小于0.10;植物的遗传多样性与其繁育系统和生活史等鬻切相关。 其中木本植物的群体遗传多样慧·蓉高于箕他植物;风媒戏动物散播的、分 布广且为远交的术本植物的遗传变异更多的存在于群体内,虫媒远交本本植 物的物种多态性低于风媒远交木本植物,但群体内多态性没有显著差弊;温 带木本植物的遗传多样性高于热带木本植物。 桤木属问工酶标记的研究在80年代后期较为活跃。从表l可以看出,不 第一章桤术属植物遗传静种研究避展 同时期的戆养组织对实验结暴没有影响,番群体都旨较商的杂合度和簿位基 因数量,且天然变异搴较蕙,这是桤本潺植物利用常规育糟技术手段的基础。 个等位酶做点中有9个具有多悫性(占45%),群体间的遗传距离较低,其中 18个群体懿遗传结构极为福秘,群体离其商极高的杂交率(0.95),仅4个 群体有明鼹的差异。这与Fulo”:i579)的桤木属高度岛交不索和的观点相 吻合。从试验结柴可以猎出,嘲于该地区土壤和气候条件的影响以及该地区 A。crisp较多,群体阂蕊困交流较为频繁,扶藤保罄了群体撼议蛙,箍另4 个群体生长于偏僻的山钴中,无法与其他群体交流。在研究A.crispll个天 然群体豹Ald、Aat、舅拧檬酸脆氢酶(I馥)等10释霹工酶孛 表1.1三种桤术的群体多态性指数 种 名 多卷性位点 每个位虎 每个多态牲位点 总朝臻 总精定化 种内圈 种闻固 拮料所占端托铡 萼垃基取数 等经基强数 多丰享性 指数错也指数 定他指数 A.crisp幼苗0.52 2.I 2.33 0.11 0.06 0 02 0 04 毫r≈g#s8壤槔 0.60 2.I 2。42 0。i7 0.0-5 0 0 05 A,crisp植株0,56 I.8 2 33 0.14 0.06 0.01 0 05 蔗sinuata秘营0.80 2.3 …一0.17…一~ … … 爿.crisp 撬拣0.45 1.6 2.39 0.135一~…一 较小,A1beita撼透豹豢系阕遗传差舅较大嬲,曼与地璎踅离不残毙铹,尽 a,b), 僵群俸阉蓑雾仍缀小,传计楚遗j童花耪交流雨傈持这萃孛稆秧性。为了解 个多怒性悦点具有典型的二倍体行为,而在遗传多样性和起源方面与 I3 第一章桤木藩植物遗传嚣种研旁滋磊 黉f』生存于低温圭氇带。在群体求学上,绿稽本稚锡翻缱术一样表璇毒赢袈台凄 及每个多样性位点上有相同的等位基因,这些说明了神阅的基阙交流是频繁 A.acuminata ssp戆16令鑫鑫授粉赘荜拣避行了遗传努辑,吸毒4个阖工酶 多态性位点,远低于其它桤术属植物;这四个同工酶多态性位点的酶谱带同 样表现出爽似酶二倍俸的行为。桤术属己磷究的所有种中都表现出较篱的种 间杂合度署疆较多的等位基因,嬲冀哆阅的差异较小,这可能与频繁的蒸因交 流崴接有关。 行为可靛楚在等徒酶上袭凌为渤髓二倍体,褥实舔为霞僚体(x=7)。缘楗本、 A.ruKosa等树种中同样可观察到这种二倍体化行为。在所有已调查的桤木种 中,间工酶位点都表现为典型的二倍体,而这些种均为瞵倍体,这种模式的 但这种进化的意义还不得知。因此他建议把桤木属定义为功能二倍体,他认 为这些褥秘霹靛鬯含枣子突变蠢失去功能戆萋毽拷灸,商登要滋一步谯查研 究本属中所有的种类。 耀10种核酸内切酶消化鼠释木科植物中提取的DNA,结栗袭明样术科禧 物农遗传上具有很高的稳定性。分析7弛榉术科撼物的RF∽(嫩制性片段长 度多态性)图谱,估算它们的相似性,结果与基于形态特征的分类基本~致。 lO种限制性内切酶消化,结果Pvu II是唯一能区别开两种桤木的酶。Giasson 异远小于种间。 14 第二二章桤术属植物{1种及适应性研究 第二蠢橙木属植物的引种及适应性研究 长江中下游平搽瘩露缝区,大,l、滋泊众多,江潺溪渠级横,主藩圭馥下承 位较麓,水涝灾害频繁。目前,该地区四旁横树、道路绿化、河岸和农田防 护林的适生树秤不多,特稍是耐求湿的优良树稀稀少。近=卡多年来,稽木 (Alnus 湿多功能树种。为了进一步丰富该地酲的绿化树种资源,并为系统开展桤木 羼檀竣熬包糖杂交肖耪在蠹懿邃徙菠嶷臻交壤套弯骥耪鹳,我粥扶[999年 开始,引进桤木属树种15种,其中国外桤木树种11种,共计59个种份, 在中爨禄车串浚疆椿新瘫(游江富黼)送行雩l耱试验 1桤术属植物分布垮起源 i.1稳术属爵然分布 穗本属为桦本科植物,全世器共鸯40余秽,我疆产11静。撼本属援物 喜光、喜湿、根系发达,对土壤要求不严,适应性强,分布广。桤木属植物 为搀本秘檀耱中最漂始戆壤,主蘩分布予致我窝蔻美、蕊替、攘魏跑遮嚣, 有一种分布到安第斯山脉。桤木属植物分为:蒙囱桤木组 和桦桤组(Sect。Alnobetula)。 东经∞一112。,扶我国广嚣、贵媸、四川南部、云毫、嚣藏歪尼泊尔、不丹、 洙尔懿区壹羚瓣富汗衽罄鞠东部。z。懿2itima为,j、赛本,室长在海岸及灞澹 周围潮湿地,分布缔度与前两种大致相同。并分为两个大的居群(其中一个 在特披华州、马里兰炳_萃舀弗吉尼驻半岛,另一个在俄克拉赫马州的南部和中 部)套美国东部闯叛。 ; cortada、 日本和北朝鲜,为东妲特有类型。爿.subcordata、爿。orientalis、A l S 第二章桤术属植物§f种及适应性研究 和南煲洲,A.oblongifolia分布于从溉刹桑那,kr{中部和掰疆西哥中西部直到 墨西哥北部的广大地区。A.rab.na分布在阿搬加斯蚕H加利福尼受州的太平洋 布在欧亚大陆和北美洲的温带地区,猩我国蹰部、蒙古和前苏联西伯利亚地 区蓠辑。 。 种,分布子贵州北部、斟川、酝西南部和甘肃东南,生子海拔500—3000m的 由坡或淫岸林中。该种在匿川珏麓部、贵她珏部和云南被 拔1500-3000m豹潮漫出谷中,A。lana括寝分毒予裙列嚣帮。 桦桤组主要分布与欧亚大陆和北美。其中A.以物a为日本特有,爿.viridis 为灌本或枣孬木,生长予寒冷城区,分布韵南陵为疆尔干半岛、我国东托、 美国加利福尼亚州中部、田纳魏州和北卡罗米纳州,在欧洲北部间断。 l_2獠木属起源 摄据化石资载秘瑷代盘煞理分毒分援,搀本科檀物楚奁零亚送起淫懿。最 早的榉木植物的化石是易辨认的与桤术属植物有亲缘关系的花粉一桤木粉, 发凌予蠢本浼囟登纪桑耨颓。瑗筏撵本辩植物静遗溪分布资料,避一多支持 了东溉区是桦木科植物起源地的推测。在该科130种植物中,东理区就占了 77种,明显魄多子其它备区.诧外,求亚区棚有桦术科植物所有的6个属和 i3个缀。 植物分类学家认为,东亚(包括中国和日本等共产12种,四组都有) 是携本震{妻物懿分寿中心(霞2。};擎序篷鑫潮逶强境,霹能是吉老懿楦本 属植物在我国西南地区的残遗类型;蒙自桤组是桤木属中最原始的组。 蔗intida分布在竟侍米尔遣区、阿富汗和伊朗,说明上述地区可能是缀成了 早期樾本属植物由东亚向欧洲迁移的通道。Fulow(1979)认为桤本属植物可 能是起源予旺洲的温带地区;陈之端簿(1994,1995)提出桤木属植物起源于 客亚的亚热繁地区,茂惑,彝拳、疆教毒,势透过囱令隧褥秘大疆洋到达趣 美。 {6 第二章桤术属植物引种及适应性研究 图2.1桤木属植物的分布图 2.Sect.Alnus 1.Sect.Clethropsis3.Sect.Cremastogyne 2.引种试验材料与方法 林木种质资源收集是遗传育种工作的基础,在林木遗传改良研究中具有 重要意义。为了丰富桤木育种群体,研究桤木属植物系统发育生物学,进一 步通过杂交育种培育新品种,我们从1998年开始与世界其他国家联系,进 表2.1 7种主要桤木属植物引种地生境条件 种 名 采种国 采种点 纬度 经度 海拔(∞) 千粒重(g) FRA 44.04 1.1 322 0 93 A.豇utinosa JULIEN RUS OBLAST51.3 31.3 30 1.53 BEL 51.15 4.4 40 1l82 ZOERSEL BGR VODA 二。.4 42.5 400 1.4 A.rubra CAN CASSIDY50,37 127.15 37 O.70 CAN HORNE54.16 130.16 46 O.43 CAN SALMON53.35 131.42 10 O.74 CAN CREEK50.49 120.07 13lO O.45 A.rugosa USA 。4船4脚 40.54 124.05 1500 0.29 CAN GALENA50.35 117.52 607 O.38 A.tenaifoliaCANCRANBROOK49.30 117.47 712 O.56 CAN EDSON53.35 116.30 O.52 CAN DEASE58.32 130.00 817 0.72 CAN ISKUT57.53 130.00 1033 O.71 CHN LAOSHAN35.39 139.17 210 3.09 A.japonica A.sibirica 36.42 123.38 175 0.52 CHN LAOSHAN A,[OFMOSaDaCHN YULI 48.52 130.25 1600 0.43 CHN 24.09 120.40 40 O.73 TATAJIA CHN TAIMALI30.13 119.11 200 0.4t 第二章桤木属植物引种及适应性研究 行桤木属植物引种研究。 2.1桤木属植物引种介绍 中国林科院亚林所分别l??n.一900年与加拿大国家林木种子中心及多 量lO一209不等,在冰箱内贮藏至春天播种。经过两年时间的初步试验研究, 选择其中5个国外树种及国内三个树种共8个树种进行分析。具体引种地点 生境条件如表2.1。 2.2桤木属引种材料育苗 25cm。基质采用经多年育苗的黄泥土加2成河沙、半成焦泥灰和适量的复合 肥掺和而成。每个种份播种30袋,每袋播种子40一50粒,少许盖土,在覆 盖稻草。2001年,采用穴盘容器进行重复播种育苗,基质基本相同。 第二年春,部分茁木进行移栽,对留床苗木观测生长节律。 夏天高温干旱季节,及时进行喷水保湿。 2.3观测项目 播种当年观测出苗和保存情况、生长量、落叶期。 第二年对留床苗木观测展叶期,夏季受害情况,每种份取lO株测定苗 高生长节律。另外对桤木、欧洲桤木、齿叶桤木、赤杨、台湾桤木等五个物 种测定了叶绿素含量、光合速率等生理指标。 3结果与分析 3.1苗木保存情况和适应性 没有精确地观测种子发芽率,仅根据出苗数量分为ABCDE五个等级。在 等出苗较差。但从育苗当年苗木保存情况看,在外来11个树种中,有5种 保存一定数量苗木。它们是齿叶桤木、欧洲桤木、红桤木、薄叶桤木 lR 辩二蕈槌术属植物{f种及适应性研究 表2,3gl滋桤本菌本保存和生长表现 种名 种源号 出荫等级保存株数苗高 基径 落叶期展叶期 次年离 次年稳 旱害 t二- cm 17 D 27 32l O79 24l 240 — A.“Ⅳtinosa 12月下3胃下 (致测桤末) 19 E 6 15.8 0.47 12胃下 148 1.45 — 34 D 24 236 0 68 12月中3月下170 2 13 — 45 D 18 19,9 0.56 12胃中 218 2.58 — 48 D 15 20.4 0.59 12月中3月中210 233、 一 A.rttb/a 13 D 11 i1,3 0.30 12月下3月中 7l 0。85 ÷ (红稳术) ls E 0 23 D 6 14.8 0.47 12月下

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